利用基因工程毕赤酵母菌表达PCV2抗原和一种分子佐剂作为免疫反应增强剂
断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)是一种病毒性疾病，在世界范围内具有高流行率，主要感染6-15周龄猪。PCV2主要引起猪只消瘦，现主要有4种疫苗用于控制PCV2。尽管这些商业化的疫苗能够控制PCV2的感染，但是这些疫苗仅能引起体液免疫。分子佐剂不仅加强体液免疫，而且当其与重组蛋白组合时能够增强细胞免疫反应。本研究的目的是为了获得一种分子佐剂来增强免疫反应，分子佐剂来自酵母培养基中，将用于猪的PCV2疫苗中。
材料与方法
基因工程毕赤酵母菌表达系统同时表达PCV2抗原和一种分子佐剂，由AOX1启动子控制翻译。单个毕赤酵母菌落转入载体，挑取酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂平板(YPD)上的菌种，接种于10 mL YPD液体培养基中，于25 ℃培养16 h后作为菌种。所有的液体培养实验的工作体积为100 mL。每12 h后添加甲醇到培养基中，诱导3天。7600G离心10 min，收集沉淀和上清，于-20 ℃保存。免疫印迹分析/WB分析表达的PCV2抗原和分子增强剂。利用固定化金属亲和层析技术(IMAC)咪唑梯度纯化蛋白。两种蛋白都制备成油包水乳剂，肌肉注射免疫三周龄仔猪，3周后，加强免疫1次。
结果
甲醇诱导毕赤酵母菌表达PCV2抗原(细胞内)和分子增强剂(培养基中)两种蛋白。Western blot检测两种蛋白见图1，仅有重组克隆Q1-1表达了佐剂，未出现在CAP对照组中。两种蛋白都采用半纯化，用于制备油包水乳剂形式。三周龄免疫两倍剂量来评估PCV2抗体滴度的增加，接种两周后无局部不良反应。
结论与讨论
PCV2抗原和分子增强剂的编码基因成功转入P.pastoris基因组中，并且由AOX1启动子启动。基因工程酵母菌在甲醇的诱导下累积表达两种蛋白。结果显示，新型基因工程菌能够用于生产蛋白，用作PCV2疫苗乳剂。本实验中免疫猪诱导PCV2特异的中和抗体和T细胞介导的免疫反应。
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