摘 要

　　胸膜肺炎放线杆菌，原为副溶血嗜血杆菌和幽门杆菌，是猪传染性胸膜肺炎的病原体。胸膜肺炎放线杆菌共有1-15种类型的血清，目前，在澳大利亚，1、5、7、15血清型被认为是最主要的血清型。为了检测这种说法是否准确，我们实验室花了11年多的时间，通过隔离检测的方式，研究了胸膜肺炎放线杆菌的各种类型血清的患病率，并提交了这份报告。本研究调查了血清型5株的遗传多样性，最后建立区分血清型的多重PCR检测方法。

　　材料和方法

　　从2002年2月至2013年4月期间，共收集了336株胸膜肺炎放线杆菌。经凝胶扩散或间接血凝试验对这些菌株进行分型。然后，比较在2002年2月-2011年12月与2012年1月-2013年4月两段时间内的菌株分型结果。

　　用ERIC-PCR方法对血清型5株进行基因分型。从澳大利亚三个州的11个农场共分离到的27株菌株，用ERIC-PCR方法进行分析。

　　在澳大利亚中心国际农业研究资助下，我们开发了一个多重PCR方法用于识别和鉴定胸膜肺炎放线杆菌中的1、5、7、12和15血清型。所有关于胸膜肺炎放线杆菌的15个血清参考株和411个隔离场都通过多重PCR方法进行了测试（其中有1个来自新西兰，5个来自墨西哥，11个来自印尼，394个来自澳大利亚）。另外，这种多重PCR方法的特异性还通过了26种不是胸膜肺炎放线杆菌菌种的验证。

　　实验结果

　　在2002-2011年这十多年提交的研究报告里，1，5，7，12，15血清型以及未分型的血清型占了全部的94％。在研究结果里，血清型15占的比例最大，占全部的35％，其次是血清型7，占26％，再次是血清型5，占19％，血清型1占9％，未分型的占4％，血清型12只占1％。

　　而在2012-2013年的研究结果里，血清型1，5，7，15和未分型的占了100％。这期间，占据主要份额的是血清型7，占42％，其次是血清型15，占22％，再次是血清型12，占16％，血清型5、1和未分型的分别只占了11％、4％、4％。

　　这种新的多重PCR方法提供了411个胸膜肺炎放线菌分离株的物种特异性条带，且与传统的血清型1（46个分离株）、5（81个分离株）、7（80个分离株）、12（16个分离株）、和15（117个分离株）一致。超过25个未分型的分离株中只有两个被检查出在多重PCR中不产生特异性条带。

　　分析在2003年至2013年中占据主要地位的这5种血清型，可以得出结论的是，来自澳大利亚三个洲11个农场的27个分离株都显示了相同的遗传印记。

　　结论与讨论

　　这些数据是在研究过程中通过对实验记录进行谨慎分析所得出的结果。正是因为意识到得出这一结果的谨慎性，相比之前的研究，我们从12份研究分析报告中获得了最重要的突破，这些数据表明了2012年血清型的构成和占比发生了巨大转变。

　　在2007年和2008年，只发现单一血清型12个分离株，而在2011年，只发现2个分离株。 而从2012年起， 发现了12个血清型7分离株。这一结果也显示了血清型7分离株相比以前而言有了明显的增加。

　　很明显，在澳大利亚，主要的血清型是血清型1，7，5，12和15，同时，有利的的是分子诊断检测能够识别所有这些血清型。检测血清型1，5，7， 12和15的方法是种属特异性的多重PCR检测法，这种方法还能够识别各种不同的血清型分离株。

　　探索胸膜肺炎放线菌株血清型5分离株克隆性所获得的数据表明，分离株是单个克隆的一个起点。