猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus of swine)猪传染性胃肠炎(TGE)是猪的1种具有高度接触传染性的病毒性疾病。临床特征为严重腹泻 、呕吐和脱水，不同年龄和品种的猪都易感，但2周以内仔猪的病死率很高，5周以上的猪很 少死亡。其它动物包括实验动物均无感染性。

　　猪传染性胃肠炎病毒(Transmissiblegastroenteritisvirusofswine)猪传染性胃肠炎(TGE)是猪的1种具有高度接触传染性的病毒性疾病。临床特征为严重腹泻、呕吐和脱水，不同年龄和品种的猪都易感，但2周以内仔猪的病死率很高，5周以上的猪很少死亡。其它动物包括实验动物均无感染性。1933年起，美国的依利诺斯州就有本病记载，此后在美国广泛流行。1946年，Doyle等确定本病的病原体为病毒，并作了比较详细的报道。1956年在日本，1957年在英国相继发生本病。以后法国、荷兰、德国、匈牙利、意大利、波兰、前苏联、罗马尼亚、比利时、南斯拉夫、我国台湾省、马来西亚和加拿大相继报道了本病。现在除阿拉斯加、北欧各国之外，在北半球，特别是北纬三十度以北的温带至寒带地区，均有本病分布。从六十年代末期起，我国就有关于本病的报道。引起猪传染性胃肠炎的病毒为冠状病毒。其它病毒如轮状病毒、腺病毒、呼肠孤病毒以及肠道病毒等亦可引起猪的传染性腹泻。本节只介绍猪传染性胃肠炎冠状病毒(TGEV)。

　　

　　1.形态特征经滤过试验、超速离心和电镜观察，证明病毒粒子的直径为90～200nm，呈圆形，有的呈椭圆形或多边形。有双层膜，囊膜上覆有花瓣状纤突，纤突长18～24nm，以极小的柄连接在囊膜的表面，其末端呈球状，直径约10nm，制片时容易使纤突脱落，所以经常只看到囊膜的边界，或者只在囊膜的某些部位有这种花瓣状纤突。某些病毒粒子在以磷钨酸负染后，可见到1个电子透明中心或没有特征的核心，其形态与粘病毒的管状或螺旋状的核蛋白结构不同。最近，有人描述猪传染性胃肠炎病毒粒子内部具有1个呈串珠样的丝状物。电子显微镜观察，猪传染性胃肠炎病毒的形态类似鸡传染性支气管炎病毒和其它冠状病毒。关于病毒粒子的大小，各书记载稍有差别。曾有报道，猪肾细胞培养物中的病毒粒子，平均直径为95nm。另一些报道证明，猪小肠上皮细胞内的病毒粒子的直径为65～95nm。病毒粒子在直径上的差别，可能与细胞类型及标本制作方法不同有关，并非毒株之间的规律性差别。

　　

　　2.基因组结构特点TGEV基因组结构尚未完全阐明,通过对Purdue115细胞适应株基因组RNA的3'端83kb序列的测定，证明它包括亚基因组RNA表达的全部基因组。除mRNAE外，其余TGEV亚基因组RNA在功能上似乎都是单顺反子。5'端约20kb被认为是转录RNA聚合酶的，在TGEV感染的细胞中早已发现有RNA聚合酶活性，但该蛋白质至今尚未分离鉴定。

　　

　　3.理化学特性本病毒含单链RNA。卤化脱氧尿核苷不能抑制病毒增殖。以核糖核酸酶处理，能破坏病毒的感染性，但病毒能抵抗脱氧核糖核酸酶的作用。已经分离获得感染性RNA。病毒的囊膜纤突由分子量为200kDa的多肽和糖类组成，在用菠萝蛋白酶处理后消失。病毒对乙醚、氯仿和去氧胆酸钠敏感。在20%乙醚中于4℃放置1昼夜，在氯仿中于室温放置10**，病毒即完全失去感染力；用01%去氧胆酸钠处理1**，部分失去活力。01%十二烷基硫酸钠处理1**，完全失去活力。病毒在胆汁中相当稳定。对胰酶有抵抗力。但是强毒株和弱毒株对胰酶和蛋白分解酶的感受性不同：毒株的毒力越弱，对胰酶的感受性越高。例如强毒SH17株，于37℃05%胰酶处理2**，不**感染力；而致弱的To163株经37℃30**，毒力**99%以上。病毒在pH4～8时稳定。在低温条件下，pH3时仍稳定。大多数毒株在pH2时1**灭活。但强毒株和弱毒株对pH的敏感性也不一致。在pH3时，37℃下可使病毒很快灭活，而在22℃则灭活缓慢。弱毒To163株在22℃2**完全灭活，强毒SH17株在22℃8**仍可测出活存病毒。病毒在一定pH下，温度越高，灭活越快。细胞培养物中的病毒在50℃经30**，其感染力的**程度，各学者的报道不尽一致：有降低2～3个对数，也有只**1个对数者。猪小肠组织内的病毒，56℃加热30**后，部分灭活。56℃经45**或65℃10**全部灭活。将病毒悬浮于1mol/L氯化镁溶液时，能加强温度的灭活作用。猪传染性胃肠炎病毒对光敏感，将105个半数猪感染剂量的粪便材料置于平皿内，在日光下照射6**，可使病毒灭活。紫外线能使病毒迅速灭活。05%石炭酸在37℃处理30**，可杀死所有病毒。005%甲醛溶液37℃20**也能使病毒灭活。病毒在冻结保存时极为稳定。在-18℃保存18个月，病毒滴度由106降到105。细胞培养病毒在-20℃、-40℃、-80℃保存365天，滴度没有****。但在37℃放置4天，则完全失去感染力。本病毒SH株和TO株在4℃条件下能凝集鸡、鼠和牛的红细胞，但不凝集小鼠和鹅的红细胞。

　　

　　4.干扰现象某些非细胞致病性TGEV毒株能干扰伪狂犬病病毒在细胞培养物中的复制。也能干扰细胞致病性牛腹泻粘膜病病毒的复制，因此常用这种干扰作用，将牛腹泻粘膜病病毒作为猪肾细胞培养物内是否存在TGEV的指示系统。方法是将被检材料接种猪肾细胞培养物，37℃培养4天后，吸除被感染的培养液，用PBS冲洗细胞2次，再接种牛腹泻粘膜病病毒，并加入新营养液，继续培养。如不出现细胞病变，即证明猪肾细胞培养物内有TGEV存在。

　　

　　5.抗原性对来自美国、英国和日本的10个毒株(包括用猪传代和用细胞培养物传代的毒株)进行交叉中和试验和蚀斑减数试验，证明TGEV只有1个血清型，各毒株之间有密切的抗原关系。而且TGEV与猫传染性腹膜炎病毒和犬冠状病毒之间存在抗原相关性。通过免疫扩散试验，表明在TGEV和血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)之间有交叉反应，但蚀斑中和试验看不到交叉反应现象。近年来，国内将我国分离的经猪传代的“TGE”华毒株、“TGE”吉毒株等与TGE的Miller(M)毒株进行了交叉荧光抗体试验，证明华株与吉株相一致，但与M株不出现交叉反应。1979年黄均健等应用荧光抗体、中和试验、酶联免疫与猪体交叉保护试验等，发现华株与M株、SH株和TO株不同。1981年钱永清等应用比利时的CLV(Coronalikevirus)血清、华株血清和M株血清制成的酶标记抗体进行交叉染色，证明由华株血清与比利时CLV血清所制备的酶标记抗体可着染华株，但不着染M株和SH株；而由M株血清所制备的酶标记抗体能着染M株和SH株，但不着染华株，从而证实华株与比利时的CLV在血清型上是一致的。1984年宣华等应用猪胎肠组织上皮细胞单层培养分离吉毒株等获得成功，并与华株、川株、M株进行了交叉中和试验(细胞培养法)，证明吉株与华株、川株一致，而与M株不呈现交叉中和反应，从而证明我国除猪传染性胃肠炎病毒之外，还存在猪流行性腹泻病毒。

　　

　　6.培养1956年Lee**报道TGEV可在猪肾细胞上连续传28代，但无细胞病变。日本原田(1963)**报告：TGE病毒SH株能在猪肾细胞上产生细胞病变，其后多次报道了应用原代猪肾细胞培养物分离获得细胞致病性TGEV毒株。也有用猪睾丸细胞、猪甲状腺细胞、唾液腺细胞、犬肾细胞、猪食管、回肠、盲肠、结膜、鼻粘膜上皮等进行TGEV分离传代的报道。初次传代时，野毒株产生的细胞病变可能是短暂的或轻微的，有时仅在整个培养物中出现几个小点，易被忽略。在用猪肾细胞盲传若干代之后，才能看到比较**的细胞病变，如细胞肿胀，胞浆内形成空泡，细胞变圆，皱缩，有颗粒，有的破碎崩解，部分细胞从单层上脱落，形成网眼状。但是即使延长培养时间，也不会使整个细胞单层破坏。而且某些毒株，即使盲传多代，也不产生细胞病变。猪的甲状腺细胞、唾液腺细胞和猪睾丸细胞对TGEV较敏感。Witte(1971)报道，在26份检样中，22份在猪甲状腺细胞培养物中出现不同程度的细胞病变，细胞单层约25%破坏，并在第1代培养物中**出现细胞病变。Stepanek(1971)认为TGEV的细胞病变在原代猪唾液腺细胞上的发展比原代猪肾细胞快。TGEV在细胞浆中增殖，不能在核内增殖，不产生包涵体。低代次的细胞培养传代病毒对无特定病原猪(SPF猪)有高度致死率，产生典型症状。高代次(125代)细胞培养传代病毒的致病性显著**。TGEV不易在鸡胚和**实验动物体内生长。最近曾有犬能被实验感染的报道，但有待进一步证实。

　　

　　7.病原性TGEV除使猪发病外，其它动物如小鼠、豚鼠、仓鼠、兔、猫、狐狸、犬和燕八哥等虽口服大量病毒也不发病，但能从口服病毒后的猫、犬(7～14天)、狐狸(15天)和燕八哥(32小时)的粪便中回收到病毒。1977年原东德报告了3群猎犬自然暴发本病，病犬呈现腹泻、呕吐、衰竭等症状，用其粪便喂健康仔猪引起了本病。TGEV能使**年龄的猪发病，5日龄以下仔猪的病死率**，可达100%。随着年龄的增长，病死率逐渐**。16日龄以上仔猪的病死率降至0%～10%。TGEV的靶器官是小肠。病毒虽可存在于病猪的各器官、体液和排泄物中，但以病猪的空肠、十二指肠、肠系膜淋巴结的含毒量**，滴度可达每克组织含106个猪感染剂量。呼吸道感染后，病毒先在鼻粘膜和肺中增殖，而后经血液进入小肠。病毒也可直接经口、咽、食管、胃(猪传染性胃肠炎病毒有抵抗胃酸和胰酶的作用)进入小肠。小肠的上皮细胞发生感染，空肠和回肠的绒毛显著萎缩，影响消化和吸收。由于肠粘膜功能性上皮细胞的迅速破坏脱落，**了产生某些酶的能力，病猪不能水解乳糖及其它营养成分，乳糖蓄积肠腔，引起渗透压增高，水分滞留，甚至吸收组织中的液体，从而导致病猪发生严重腹泻和脱水。本病的潜伏期很短，一般为24～36**，有时12～18**。发病仔猪，往往首先呕吐，继而发生严重的水样腹泻，以致脱水死亡。3周龄以上的猪发病后通常可以恢复。猪传染性胃肠炎最常发生于冬季和早春的寒冷月份。经常可使整个猪群的易感仔猪全部或多数发病。主要的病理变化为急性肠炎，伴有充血和坏死，肠管扩张，充满液体，小肠壁变薄，空肠和回肠纤毛显著萎缩，肠系膜淋巴管内没有乳糜。心、肾可出现退行性变化。

　　

　　8.生态学十二指肠、空肠、回肠粘膜中的病毒检出率和病毒滴度**，特别是空肠。病毒在鼻腔、气管、肺等呼吸道粘膜及扁桃体、颌下淋巴结、肠系膜淋巴结等淋巴系统也能良好增殖。TGEV随病猪和恢复期带毒猪的粪便和鼻汁排出。经粪便排毒的持续时间约8周。Underdahl(1975)经鼻腔内接种SPF猪，30～104天后，仍可从肺和小肠分离到病毒，且可在56%的猪体内看到肺部肉眼病变。Kemeny等(1975)检查了与感染仔猪同居的繁殖母猪的鼻汁、乳汁和粪便，发现鼻汁中的病毒检出率**。上述事实表明，TGEV经消化道和呼吸道均可感染。康复猪带毒的时间相当长，病猪和康复猪都是主要的传染来源。犬、狐狸和燕八哥能短期带毒，在传播本病方面可能起一定的作用。

　　

　　9.免疫有关猪传染性胃肠炎的免疫问题，各国已经做了许多研究工作，大多数是以对哺乳仔猪提供乳汁免疫为前提的。使用过的病毒制品有强毒、灭活疫苗和弱毒疫苗。接种妊娠母猪的途径有经口、鼻、肌肉和乳腺内接种等方法。总的说来，妊娠母猪于临产前20～40天，经口内服强毒能够产生良好的乳汁免疫，但有散播强毒，使本病常在化的危险。应用免疫血清作非经口接种，没有被动保护作用，说明乳汁抗体可能存在于肠腔内而对仔猪呈现免疫保护作用。近几年来，通过细胞培养传代和蚀斑挑选，培育和试验了几个弱毒株，正在进行实验室和野外试验。初步证明能给哺乳仔猪提供一定的乳汁免疫，但不理想。关于接种妊娠猪的最**途径，目前还存在不同意见。一般认为给母猪作口、鼻同时接种或乳腺内接种，能给哺乳仔猪提供较好的乳汁免疫。乳汁抗体包括IgG、IgA和IgM，IgA抗体主要是分泌型IgA，仅由肠管受抗原刺激时产生，泌乳期间滴度较高，持续时间较长，是乳汁免疫的主体。IgG抗体因非经口接种而产生，在乳汁中迅速下降或消失，因此在乳汁免疫中的作用不大，只能起一定的协同作用。至于IgA的形成机理，一般认为是由于病毒抗原刺激肠管的淋巴小结，致敏淋巴细胞分裂增殖，产生淋巴母细胞，经淋巴流、血流聚集于乳腺，于局部产生IgA抗体。乳汁免疫可以减少TGEV感染仔猪的死亡率，但是仔猪一停止吃母乳，又可感染发病，因此不能解决猪群的免疫问题。近些年来，各国对本病的自动免疫进行了研究，以期获得****、并迅速产生免疫力的弱毒疫苗。日本培育的弱毒To163株对哺乳仔猪无病原性，给新生仔猪经口接种To163株107TCID50/5ml，能使其产生一定程度的自动免疫性。但是免疫效果受环境温度和初乳的影响较大。根据实验结果，在18～22℃饲养的猪，弱毒接种3～4天后，即产生免疫，而在31～34℃饲养的猪却完全不产生免疫力。野外应用时，也受地区温度的影响，越是气温低的地区，产生的抗体效价越高。此外，于21～22℃饲养的猪，接种弱毒后，消化道内病毒的增殖，受摄食的初乳的抑制；而35～36℃和10～11℃饲养的猪几乎不受摄食初乳的影响。产生上述现象的机理，尚待进一步研究。据报道，最近哈尔滨兽医研究所研制成了猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻的二联细胞培养灭活苗，免疫效果较好。感染TGEV的猪**改变其对某些疾病的抵抗力或免疫机能。Regulard(1965年)报道，在出现TGE症状之前以及出现TGE症状后，给其注射猪瘟弱毒疫苗，常不能产生对猪瘟的**免疫力。

　　

　　10.诊断当不同年龄的猪于寒冷季节发生水样腹泻、呕吐，两周内仔猪病死率很高，疾病传播迅速和发病率很高等现象，都是初步诊断的依据。但如上述，猪的轮状病毒和猪流行性腹泻病毒等也能引起类似的疾病，在流行病学和症状上很难区别，因此必须依靠病毒分离和血清学试验，才能最后确诊。

　　

　　(1)病毒分离：①乳猪接种试验：采取急性发病并具有典型症状的病猪空肠(包括肠内容物)及肠系膜淋巴结，用缓冲盐水(或Hanks液)制成1∶5～1∶10悬液，2000r/min离心沉淀20**，取上清液加入青霉素和链霉素，使其最终浓度各为1000U或mg/ml，在4℃感作2～4**，或用过滤法除菌。随后经口投给2～3日龄健康乳猪2～4只。如果经12～48**出现典型症状，**结合流行病学予以诊断，但仍不能排除其它病毒的可能。②应用细胞培养分离鉴定病毒：采取接种试验典型发病猪或自然发病猪的空肠及肠系膜淋巴结，用缓冲盐水或含05%乳白蛋白水解物的Hanks液制成1∶5～1∶10悬液，加入青霉素和链霉素各1000U或mg/ml，超声波处理后2000r/min离心沉淀20**。吸取上清液用G6号玻璃滤器或滤膜(孔径02μm)过滤，滤液即为接种材料。以继代猪甲状腺细胞和唾液腺细胞较敏感，初代培养**见到轻微的细胞病变。原代猪肾细胞和猪睾丸细胞需盲传多代才可见到细胞病变。传代细胞对新分离的病毒株不敏感。原代猪胎肾细胞的培养按常规方法进行。成年猪甲状腺细胞培养比较困难，应选用小猪的新鲜甲状腺。采取后立即放入含青霉素和链霉素各1000U或mg/ml的Hanks液中，浸泡1**，而后浸入95%酒精，迅速取出，轻微火烧1～2次以达**杀死表面细菌的目的。除去甲状腺包膜和表层组织。剪取内部的甲状腺组织，充分剪碎(约1mm3)，用无钙、镁磷酸盐缓冲液或Hanks液洗3～4次，至洗液清亮无油珠为止。加入025%胰蛋白酶，在37℃预消化半**，再换胰蛋白酶消化15**。吸除胰蛋白酶后，用Hanks液洗2次，加入营养液反复吹打，静置数**，收集细胞小团块进行培养，在37℃培养2～4天换液。第1次营养液为含20～30%犊牛血清的05%乳白蛋白Hanks液。第二次营养液(换液)为含10%犊牛血清的EMEM(或1640，199)和05%乳白蛋白Hanks液的等量混合液，维持液含2%犊牛血清。接种病料前，先用Hanks液将单层细胞冲洗2次，按营养液1/10～1/3量加入接种材料，在37℃吸附1～2**倾弃或吸除多余的接种液，再加pH68～70的维持液，而后逐日观察。一般培养3～8天(培养8天时需换液1次)收毒。如无细胞病变或细胞病变不**，应在细胞上连续传代培养3～7次。经多次传代，仍无细胞病变时，为了证明细胞内是否有TGEV增殖，可用TGEV荧光抗体染色法检查细胞培养物。或用已知有细胞致病作用的牛腹泻粘膜病病毒进行干扰试验。也可应用电镜进行直接观察。如已出现细胞病变，**在细胞培养物上测定毒力，并作病毒鉴定。将细胞培养病毒作连续10倍稀释，每1稀释度接种4个细胞培养管(瓶)。37℃感作1**后，加入维持液，并置37℃继续培养，按Reed和Muench法或其它法计算TCID50。随后进行中和试验，将标准血清56℃加热30**，再将血清连续2倍或4倍稀释，加入等量的病毒悬液(约含200TCID50/01ml)。将混合液置37℃感作1**，而后取每1混合液01ml分别接种试管内的细胞培养物。每1血清稀释度最少应用两管。以中和50%病毒的血清**稀释度的试管为终点，其倒数即中和效价。

　　

　　(2)血清学试验：血清学试验包括中和试验、荧光抗体试验、间接血凝试验、皂土凝集试验、环状沉淀试验和琼脂扩散试验等。其中应用最多、检出率和特异性较好的是中和试验，其次是荧光抗体试验。日本清水等(1976)用精制病毒对野外病例的血清进行间接血凝反应，认为间接血凝价与中和抗体价有较高的符合率，可作为**诊断方法。其余**方法与中和试验的符合率较低。中和试验法是采取发病时和恢复后的血清，测定中和抗体价是否升高。如果恢复后血清抗体价升高，即为阳性。一般在感染后7～8天，最早在第4天，血清中就出现中和抗体，至少可持续18个月。中和试验的具体进行方法又分仔猪接种法和细胞培养法。自从TGEV的细胞致病株培养成功之后，现在多采用细胞培养法，包括细胞病变抑制试验、微量染色试验、染色单层试验和蚀斑减数试验。一般应用固定病毒稀释血清法。无论应用何种方法测定都需数日才能完成。其中以蚀斑减数法较为敏感。荧光抗体试验也是实验室内常用的1种方法。将感染猪的空肠制成冰冻切片，或刮取空肠绒毛上皮细胞制成抹片，以丙酮低温固定30**，而后滴加TGEV荧光抗体，在37℃染色30**，再用磷酸盐缓冲液漂洗15**，空气干燥，滴加甘油缓冲盐水，以盖玻片封固，**在荧光显微镜下检查。也可应用间接荧光抗体技术。TGEV荧光只见于感染细胞的胞浆内。据Pensaelt(1970)报道，荧光抗原在下痢初期较**，至绒毛再生时检出率**，于感染后7天就不能检出荧光细胞。(3)电子显微镜和免疫电镜观察：①电子显微镜观察：取TGE病猪粪便10ml，以001mol/LpH76PBS作1∶4稀释，高速离心后，取上清1滴置于铜网上，用2%磷钨酸负染后，在电镜下观察病毒粒子。②免疫电镜观察：取待检的病毒滤液(抗原)2ml，加入1∶50稀释的TGEV免疫血清8ml，于37℃水浴中感作1**后，放4℃冰箱过夜。次日，以7000g离心30**。沉淀物中加适量蒸馏水重新悬浮，吸取上清1滴置于铜网上，以2%磷钨酸负染后，于电镜下观察病毒粒子的凝集状况。应当特别注意，在欧州的许多国家以及美国发现1种猪呼吸道型冠状病毒(Porcinerespiratorycoronavirus,PRCV)，该病毒主要在呼吸道生长，经呼吸道传播。被感染猪症状轻微或无临床症状，但用荷兰分离株经鼻接种SPF猪可引起致死性肺炎。PRCV与TGEV具有很高的抗原相关性，除抗TGEVS蛋白单抗外，抗TGEV抗体以及大部分单克隆抗体均可与PRCV产生交叉中和反应，在做病原和血清学试验时，可依此进行鉴别诊断。