猪肺炎胸膜肺炎放线杆菌和酵母聚糖模型中土拉霉素促进白细胞凋亡和抑制促炎因子CXCL
中国养猪网讯： 引言
PMN(中性粒细胞)凋亡，由巨噬细胞清除(Mφ;胞葬作用)，减少促炎因子介质产生，例如白细胞介素-8(CXCL8)和白细胞三烯B4(LTB4)，是调节感染后炎症反应的关键物质。在很多疾病中，该过程的障碍会造成宿主组织损伤。胸膜肺炎放线杆菌(APP)引起猪胸膜肺炎，表现为肺部过度炎症和严重组织损伤。感染APP的肺部损伤部位存在大量的活的或坏死的中性粒细胞(PMNs)。用抗生素治疗和固有的免疫调节作用，对于感染性炎症有良好的临床疗效。最近研究表明土拉霉素在牛肺炎模型中有很好的抗炎症活性。鉴于土拉霉素越来越普遍用于猪治疗的现状，本研究的目的是描述土拉霉素(TUL)潜在猪肺炎模型中的免疫-调节作用。
材料与方法
新鲜获得的PMNs或者是单核巨噬细胞Mφ用土拉霉素TUL(0.02-2.0 mg/mL)分别与APP一起或单独在体外作用0.5-2 h。在活体内，健康仔猪TUL(2.5 mg/kg)处理，或与APP(1.5x107 CFU)混合接种或不解种。为了直接观察TUL在体内无细菌时的抗炎症反应，仔猪注射酵母聚糖(1 mg/kg)。按照之前描述的方法，采用镇静和全身麻醉的情况下，分别在感染后3 h和24 h收集支气管肺泡灌洗液。剖检进行总值形态分析和每个时间点进行组织学采样。n≥3/组用于所有的体外试验，n≥6/组用于体内试验研究。ANOVA(方差分析)或t-检验分析数据。
结果
体内试验中，APP感染的肺与对照组相比，APP的含量和肺中性粒细胞数量增加了(p<0.01)。用TUL处理不改变PMNs进入肺的数量。在两组猪肺部炎症模型中，与在培养基中一样，TUL诱导中性粒细胞和Mφ细胞凋亡，但是细胞不坏死，在时间和浓度一定的情况下。采用ELISA(p<0.05)，TUNEL荧光染色实验(p<0.05)，细胞凋亡蛋白酶-3剪切(激活)的免疫印迹法(p<0.05)确定。另外，与对照组相比，TUL处理增强PMN胞葬作用和Mφ的吞噬作用(p<0.05)。APP接种的肺，TUL处理组的促炎因子CXCL8浓度较低(p<0.05)。LTB4是一种强嗜中性粒细胞，在APP和酵母聚糖接种的肺中增强;在这两种情况下，TUL处理与LTB4的显著减少有关(p<0.05)。此外，在APP感染的猪肺中，在整体上和组织学上，TUL显著减弱疾病所致的病理变化。
结论与讨论
在呼吸道病原体的反应中，例如APP、PMNs过度渗透和激活，会导致严重的组织损伤。因此，感染病原和明显的宿主免疫应答对于治疗细菌感染引起的炎症性疾病都是很好的，包括猪肺炎。本研究的发现表明，在体外猪的PMNs和Mφ与接种APP和酵母聚糖猪的试验中，TUL具有免疫调节的作用。确实，TUL提升PMN细胞凋亡，Mφ清除坏死细胞，并降低促炎症介质产生。总之，这些数据表明，TUL除了有抗菌特性外，还有能将固有免疫应答的抗炎症物质传递给猪。
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