中国养猪网讯：　　引言

　　水包油包水乳化佐剂技术，如Montanide TM ISA206 VG(ISA206)，用于猪口蹄疫疫苗已经超过20年了。这些油乳化技术代替氢氧化铝佐剂。它们能够诱导很强的短期和长期的免疫反应，主要由中和抗体所介导，其粘度低、副反应小。

　　不同亚型FMDV疫苗之间没有交叉保护力。最近已证明CD8+T细胞免疫应答能调节不同亚型之间的交叉保护，交叉保护的选择就是开发新的佐剂来刺激更具有特异性的细胞免疫应答。因此，我们选择了一种新的佐剂，具体丰富的轻矿物油，能够刺激产生体液免疫和细胞免疫应答。Montanide TM ISA201 VG(ISA201)是在Montanide TM ISA206 VG的基础之上开发的。以前已经显示，ISA201佐剂在医学和小鼠研究中显示保护双重乳化佐剂ISA206的注入能力、稳定性和安全性。同时提高特定的抗原细胞介导的免疫反应。

　　结果显示，ISA201比ISA206能诱导更高的体液免疫和细胞免疫应答对抗FMD，增加对毒力的保护。

　　材料与方法

　　50头2月龄仔猪，FMDV血清阴性的猪随机分为3个组，每组15头，剩下5头作为非免疫对照组。15头免疫O型-ISA206佐剂的灭活苗，15头免疫O型-ISA201，15头免疫无佐剂苗。所有的疫苗都含有相同的抗原浓度。在每一组中，5头免疫完整剂量(2 mL)，5头免疫1/3剂量(0.67 mL)，5头免疫1/9剂量(0.22 mL)，来确定每种疫苗的PD50。

　　为了评估疫苗的安全性，测量免疫前和免疫后4h，1d、2d、3d和5d的体温(dpv)。

　　采集血样时间为免疫后0d、3d、7d、14d、21d和28d，用ELISA检测抗FMDV抗体滴度，IFNγ、IL-2、IL-4、IL-10细胞因子和CD4+、CD8+特异性T细胞浓度。

　　为了确定疫苗的保护效果，50头猪在免疫O型口蹄疫后28天，肌肉注射攻毒1000PID50(2 mL)。连续10天监测口蹄疫的临床症状，利用寇氏法(Karbermethod)测定每种疫苗的半数保护量PD50。

　　结果

　　ISA206和ISA201作为佐剂的疫苗免疫猪都是安全的。所有的全剂量疫苗，免疫后出现-1 ℃高热反应，并在两天后消失。

　　ISA201组的FMDV抗体滴度明显高于ISA206组的全剂量、1/3剂量和1/9剂量，在免疫后的14d、21d和28d。

　　ISA201全剂量免疫后，CD4+和CD8+淋巴细胞比ISA206组和非佐剂疫苗组在免疫后7d和28d都要有所增强。

　　最后，ISA206和ISA201的全剂量和1/3剂量都能在O型口蹄疫疫苗免疫后28d提供完全保护力(5/5都没有临床症状)，然而，未免疫组都没有很好的保护力(保护率2/5)。所有非免疫组都表现临床症状。然而，当疫苗使用1/9计量时，仅ISA201有完全的保护力，与参考佐剂(ISA206的PD50:1/10剂量;ISA201的PD50:1/15.6剂量)相比，ISA201佐剂降低了口蹄疫疫苗的半数保护量PD50。

　　结论与讨论

　　本研究中，基于新的双重乳化佐剂Montanide TM ISA201 VG的FMD疫苗是安全的，并且诱导更高的体液免疫和和细胞免疫，对FMD的保护力比Montanide TM ISA206 VG的参考疫苗更高。

　　Montanide TM佐剂增强了细胞免疫应答，延伸了细胞免疫对密切变异株的限度，例如当地流行的FMD病毒株，同时维持FMD疫苗的稳定性、使注射更加容易和安全。