引言

　　猪流感病毒分离株有指定的亚型或血清型，如果两个分离株发生HI(血细胞凝集抑制试验)交叉抗原反应，则不足以进行预测。事实上，相同型的血细胞凝集素分离株之间极少有或根本没有交叉抗原反应。本研究的目的是分析最近从西班牙农场分离到的SIV病毒株在HI中的抗原关系。

　　材料与方法

　　2009-2011年，西班牙的14株SIV分离株，属于SIV的3种亚型(6H1N1，包含大规模流行的H1N1、4H1N2和4H3N2)作为HI抗原检测的3个血清组：a)通过环化的2-溴乙胺氢溴酸盐(BEA在0.2 N氢氧化钠的作用下环化成BEI，BEI具灭活作用)灭活14株分离株，多次重复免疫本地猪获得单一特异性的抗血清(免疫4次，分别在42日龄、56日龄、70日龄和84日龄)。这种情况下，血清设置3个重复检测同源株，然后血清用PBS稀释H1N1(1:160)和其他亚型(1:320)，从而使分析标准化。b)利用Spain Gripork® (GP;HIPRA)和Gripovac 3®(G3;Merial)商品苗免疫得到猪血清。这种情况下，免疫4组(20头/组)分别为：A组—2份剂量的GP，B组—1份剂量的GP再免疫G3，C组—1份剂量G3再免疫GP，D组—2份剂量G3，E组—非免疫组。血清合并之前先用HI检测。c)先用商品SIV分离株(GD Deventer，The Netherlands)的H1和H3检测100份野外血清。野生血清滴度用一个分离株进行比较(1:1)分析，结果表明从相同的地方采集的血清，通过相关分析和4类kappa系数(阴性、低、中和高负载)，不同的分离株均是相通的的亚型。在所有的情况下，所有的试验都设置重复，HI试验的阈值设置为1:40。

　　结果

　　有一株H1N1分离株没有产生HA(红细胞凝集)反应，因此为被作为HI检测的抗原。

　　a)利用单一特异性抗原分析抗原交叉反应特异性，在HI中使用恢复正常的血清，在H1N1分离株之间显示出非常低的交叉反应(1≤40)。相反，尤其是对H3N2为抗原检测，与H1N2或H3N2分离的交叉反应较高(1:80-1:320)。

　　b)采集免疫猪的血清进行检测：当不同的分离株作为抗原来检测免疫过的猪血清时，观察到有明显的区别。对于H1N1分离株而言，A组血清仅与一株在1:40时反应明显。B组、C组和D组与3个H1N1分离株在1:80-1:160时有凝集反应。所有的组都与大规模流行的H1N1无凝集反应。以H1N2为抗原时，B组与3个分离株有凝集反应(1:40-1:160)，C组和D组仅与两个分离株有凝集反应(1:80-160)，而A组不能识别H1N2作为预期的复合产物。以H3N2为抗原，所有的组都能发生凝集反应，但是在滴度>1:80时观察到B组和D组血清偶凝集反应。E组对所有血清均为凝集反应阴性。

　　c)野外血清的分析：与H1N1分离株的结果相关性较低(平均相关系数=0.69)，H1N2(0.79)和H3N2(0.84)。同样，H3N2或H1N2与H1N1相比，HI的kappa系数较高。

　　结论与讨论

　　根据HI结果，西班牙H1N1猪流感病毒分离株看似比H1N2和H3N2有更高的抗原多样性。尽管HI仅是检测抗体特异性相关技术中的一种，目前结果强调，抗原的选择可能对结果有较强的影响。不同免疫对猪的影响表明，H1N1和H1N2的凝集反应是有限的，H3N2有轻微的凝集反应。需要不断更新疫苗来预防SIV。意味着需要通过对SIV进行监测并加速SIV疫苗的开发。